Aislamiento de ADN genómico de Myrciaria dubia (HBK) "camu camu" apropiado para análisis moleculares

Abstract

Myrciaria dubia “camu-camu”, una especie nativa de la Amazonía que produce frutos con alto contenido de vitamina C y otras sustancias importantes. Sin embargo, los estudios moleculares de esta planta son escasos, por falta de un protocolo reproducible para purificar sus ácidos nucléicos. El objetivo de este trabajo fue establecer un protocolo para aislar el ADN genómico a partir de hojas de M. dubia, apropiado para análisis moleculares. El ADN se purificó con un protocolo modificado, la calidad y cantidad se estimó por espectrofotometría y electroforesis en gel de agarosa. Adicionalmente, la calidad se evaluó mediante RAPD. El ratio de calidad (A260/A280) promedio del ADN fue 1.9±0.1 y el espectro de absorción UV/Vis presentó un único pico de máxima absorbancia a 260nm. Mediante electroforesis el ADN fue íntegro y sin ARN. También, la síntesis de amplicones RAPD nos sugiere ausencia de inhibidores para polimerasas. La concentración promedio del ADN fue 99±33 ng/µl y el rendimiento promedio fue 237±80 µg ADN/g hoja. En conclusión, se ha establecido un protocolo de aislamiento de ADN genómico a partir de hojas de Myrciaria dubia “camu camu”, caracterizado por permitirnos obtener ADN de alta calidad y cantidad suficiente para análisis moleculares como el RAPD.

Myrciaria dubia "camu camu", a native species of the Amazon that produces fruits high in vitamin C and other important substances. However, molecular studies of this plant are scarce, for lack of a reproducible protocol to purify their nucleic acids. The aim of this study was to establish a protocol to isolate genomic DNA from leaves of M. dubia, suitable for molecular analysis. DNA was purified with a modified protocol, the quality and quantity was estimated by spectrophotometry and agarose gel electrophoresis. Additionally, the quality was assessed by RAPD. The mean ratio of quality (A260/A280) of DNA was 1.9±0.1. By means of electrophoresis the DNA was intact and without RNA. Also, the synthesis of RAPD amplicons suggests absence of inhibitors for polymerases. The average concentration of DNA was 99±33 ng/µl and the average yield was 237±80 µg ADN/g leaf. In conclusion, was established a protocol for isolation genomic DNA from leaves of Myrciaria dubia "camu camu", characterized for allowing us obtain DNA of high quality and quantity sufficient for molecular analysis as RAPD.